PCR引物的设计原则-乐动体育热门赛事

来源：乐动体育热门赛事作者：华仔浏览：219 时间：2017-10-21 17:12

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摘要：实验步骤首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应（即错配），再次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。引物设计应注意如下要点：1．引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp。2．引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基，如GGG或CCC

实验步骤

首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物不能在模板的非目的位点引发

DNA

聚合反应

（

即错配

）

，再次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。引物设计应注意如下要点：

．引物的长度一般为

15-30 bp

，常用的是

18-27 bp

。

．引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是

’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物

’端出现

个以上的连续碱基，如

GGG

或

CCC

，也会使错误引发机率增加。

．引物

’端的末位碱基对

Taq

酶的

DNA

合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为

的错配效率明显高于其他

个碱基，因此应当避免在引物的

’端使用碱基

。

．引物序列的

含量一般为

40-60%

，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的

含量不能相差太大。

．引物的另一个重要参数是熔解温度（

）。这是当

％的引物和互补序列表现为双链

DNA

分子时的温度。合理的退火温度从

℃到

℃。为获得最佳结果，两个引物应具有近似的

值。

．引物二聚体或发夹结构也可能导致

PCR

反应失败。应该尽量避免。

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